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荧光定量PCR(QPCR)

荧光定量PCR(QPCR)

品牌:博尔夫
价格:mRNA100元/样/基因,miRNA250/样/基因





实时荧光定量PCR (Quantitative Real-time PCR)是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质检测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法,是通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。Real-timePCR是在PCR扩增过程中,通过荧光信号,对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期,模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系,所以可以成为定量的依据。



将标记有荧光素的Taqman探针与模板DNA混合后,完成高温变性,低温复性,适温延伸的热循环,并遵守聚合酶的链式反应规律,与模板DNA互补配对的Taqman探针被切断,荧光素游离于反应体系中,在特定光激发下发出荧光,随着循环次数的增加,被扩增的目的基因片段呈指数规律增长,通过实时监测与之对应的随扩增而变化荧光信号强度,求得Ct值,同时利用数个已知模板浓度的标准品作对照,即可得出待测标本目的基因的拷贝数。



样本接收→引物合成→提取总RNA→RNA浓度测定→逆转录成cdna→荧光定量PCR→数据分析



扩增完毕后,进入结果分析界面,看CT值、起始拷贝数、标准偏差等,如果是SYBR做的话,再看下溶解曲线。以β-actin为内参照基因,与对照组相比,得到目的基因表达的相对定量值(RQ值),将RQ值用于统计分析。



1、动植物组织样本、细胞沉淀、血清(或血浆)、RNA、cDNA等用干冰运输
2、细胞样本可附带培养基(保证密封,无外漏,无污染),常温运输
3、全血样本需用EDTA抗凝管4度运输。



1、医学领域:在对病原体的检测、肿瘤基因的检测以及药物的疗效考核中发挥了巨大的作用。
2、基因工程领域:在基因表达、转基因以及单核苷酸多态性(SNP)及突变分析的研究中提供了强有力的检测证据。