ELISA（酶联免疫吸附测定）

酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay，简写ELISA）指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法。酶联免疫吸附测定（ELISA）为免疫学中的经典实验。



酶联免疫吸附测定（ELISA）为免疫学中的经典实验，其基本原理是使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性；使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅有无定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。



取出ELISA试剂盒→封闭→洗涤→加入一抗→洗涤→加HRP标记的二抗→洗涤→底物显色→加入终止液→酶标仪读数→数据分析



以标准品浓度作为横坐标，OD值作为纵坐标，确定它们之间的函数关系，制定标准曲线方程，计算待测样本浓度。

样本（血清或血浆）应清澈透明，悬浮物应离心去除，避免使用溶血、高血脂样本。样本收集后若不立即检测，需冻存于-80°冰箱，避免反复冻融。干冰运输。

ELISA测试法由于具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点，现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断。同时也应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定，不仅适用于临床标本的检查，也适用于血清流行病学调查。ELISA测试法在生物医学各领域的应用范围将越来越广。